多肽通常是指少于100 个氨基酸通过肽键连接而成的化合物,其相对分子质量低于10000。多肽类药物在治疗肿瘤、糖尿病、心血管疾病、骨质疏松症、胃肠道疾病、中枢神经系统疾病、免疫疾病等方面具有显著的疗效。相较于化学药物,多肽类药物具有更高的生物活性,特异性强且毒性反应相对较弱,与体内受体的亲和性较好。
因为多肽在机体内扮演的角色多种多样,参与众多生理功能,因此多肽药物的发展前景十分广阔。多肽药物具有显著的活性、强特异性、良好的受体的亲和性、较低的毒性、不易在体内蓄积,并且免疫原性弱于一些蛋白药物,甚至更小的多肽分子可能无免疫原性。此外多肽药物在结构上容易改造、生产上也相对容易,甚至可以用合成途径来解决生产问题。
多肽的制备方法主要有天然提取,化学合成,基因工程和生物重组法等,对于结构相对简单的多肽,化学合成是做常用的制备方法,也是多肽药物的主要制备方式。氨基酸保护剂和保护氨基酸是合成多肽类药物的主要中间体产品。筑药网提供一系列的氨基酸中间体产品如CAS: 55456-40-1、CAS: 1113-49-1、CAS: 557768-95-3、CAS: 17186-53-7、CAS: 169566-77-2等产品,以助力多肽药物的合成研究。
关于多肽药物的分析手段,首选是LC-MS还是ELISA?常常有人认为,在分子量较小的情况下,LC-MS在大分子生物分析中是具有优势的。然后由于LC-MS涉及到残留、保留、回收率以及复杂的样品前处理等问题,对于分子量较大的多肽、蛋白质和抗体等大分子,建议采用ELISA分析方法。
多肽类药物存在一些弊端,例如半衰期短,会被机体快速消除,为了达到有效浓度可能需要频繁给药,成本较高且给患者造成较大的生活负担;稳定性差,容易被酶解,甚至对酸、碱、高温或有机溶剂等敏感而容易失活等。那么在进行多肽药物研发时,我们如何处理不稳定的多肽以增强其稳定性并便于其分析呢?
(1)对于含有肝素结合因子来源肽的采样,不宜使用肝素。
(2)加入EDTA可以帮助抑制金属蛋白酶的活性,提高生物样品的稳定性。
我们可以添加特异性的酶抑制剂或者采用鸡尾酒式的酶抑制剂,在现实当中我们还要注意鸡尾酒溶酶问题,因为有的溶酶它是容易造成溶血的。对胰岛素一类的药物一定要注意防止溶血的现象产生。 对于GLP-1类物质,应考虑添加DPP-IVF抑制剂以防止降解。因此,了解被分析物的性质至关重要。对于稳定性的影响一些特殊的样品管在实践当中也可以用起来,他们也能起到一些有效的保护作用。
目前就有很多好的商业化采取管可供选择,例如P800(管子)、P700(管子),它里面都添加有一些特定的蛋白酶抑制剂,特别是可以用于GLP-1、GIP这样的样品采集,经过我们实际测试,对胰岛素、血糖、多肽等物质具有很好的稳定效果。
所有的分析试剂要需要定期进行pH值复检,复杂试剂需要现备现用。实验室的恒温恒湿条件是很重要的,如果条件允许,可以购置高端的恒温恒室的孵箱,在其中进行培育和生物分析反应。
如表面活性剂吐温20可以有效预防药物和管壁的吸附,储存液和工作液的配方也需要注意。优良的配方在生物分析当中是相当重要的,它有助于防止蛋白相互作用导致的聚集,可以使用优质玻璃管去配置,避免这些样品吸附的问题。如果遇到难以解决的问题,则应该现配现用。
当然,必要时可以综合运用以上几种方法。
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